293无血清培养基

　　细胞驯化

　　1）直接驯化

　　大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应Balance CD 293 medium，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。

　　2）渐进式驯化

　　注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化

　　①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到2x10 6 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25；

　　②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；

　　③当细胞密度3-4天后达到3x10 6 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；

　　④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培养基；

　　⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×10 6  cells/mL，细胞活率大于90%，这说明细胞已经*适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般传代2-3次后再进行转染实验。

　　注意: 一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代状态会有改善。

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